IMBG (imbg) wrote,
IMBG
imbg

Categories:

HEK 293

 Человеческие эмбриональные клетки почек HEK293 - одни из самых популярных объектов исследований в биологии. Неприхотливые и выносливые почти как Hela (помните нашу статью о судьбе этой клеточной линии), они обладают одним преимуществом - они очень легко трансфецируются любыми плазмидами с помощью самых дешевых реактивов. Та же Hela или ряд других клеток чаще всего требуют довольно дорогих реактивов для доставки плазмид внутрь. А некоторые - например фибробласты - вообще не трансфецируются никак, помимо вирусов.


Клетки HEK 293 с YFP маркером

Есть две линии 293-тьих: одну мы используем для рутинных опытов, а другие - 293Т - для производства вирусов или наработки белков. Мне всегда было недосуг почитать, чем эти два вида отличаются. Пока я случайно не побывална лекции по клеточной биологии у местных студентов-медиков (они такое изучают на втором курсе).  Итак, конспектирую по памяти для себя, чтоб не  забыть, и буду благодарен за указание неточностей и ошибок: я хотел бы сохранить эту информацию для себя, а более надежного вместилища, чем  ЖЖ, не вижу.

Итак,из человеческого эмбриона были взяты клетки почки. Как известно, для того чтоб их можно  было культивировать бесконечно, клетки нуждаются в иммортализации. Это было произведено с помощью инфицирования их аденовирусов пятого серотипа. После отбора большого количества клонов был найден тот, кто стал прародителем клеточной линии. Его порядковый номер был 293. У НЕК293 постоянно синтезируются вирусные белки E1A и Е1В (Pubmed), что дает клеткам бессмертие, а также несколько видоизменяет метаболизм клетки: это надо всегда иметь в виду, перед тем как планировать изучить новый процес с использованием этой линии.

Позднее HEK293 были трансфецированы еще и Т-антигеном SV-40 вируса. Этот белок сам по себе может иммортализировать клетки, но в случае с уже бессмертными НЕК 293 он добавил возможность эписомальной репликации любых плазмид, содержащих SV40 Ori репликон - а его содержат многие ходовые плазмиды. В результате плазмиды мсами мультиплицируются в клетках при трансфекции, и выход рекомбинантных белков растет на полпорядка и больше. Поэтому этот вид клеток часто используют для наработки рекомбинантных ретровирусов.

Вот такую лекцию, только еще и с картинками, прочитали студентам мединститута второго курса. И где мои шестнадцать лет?
Tags: beautiful science, starokadomskyy
Subscribe

promo imbg september 10, 2015 18:16 3
Buy for 10 tokens
Наконец я собрался и запустил свой сайт: без особой концепции и особых навыков, а как-то просто так, щоб було: starokadomskyy.com Изначально, я хотел сделать его неким онлайн-резюме, которое я б использовал при поиске новых позиций. однако практика показала, что никто не будет копаться в…
  • Post a new comment

    Error

    default userpic

    Your IP address will be recorded 

    When you submit the form an invisible reCAPTCHA check will be performed.
    You must follow the Privacy Policy and Google Terms of use.
  • 10 comments